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Actividad enzimática desde ΔA/min

Actividad en U/L y µkat/L desde la velocidad de cambio de absorbancia, el coeficiente de extinción, el paso óptico y los volúmenes.

La actividad enzimática en U/L es (ΔA/min muestra − ΔA/min blanco) × V total × 1.000 × dilución / (ε × paso óptico × V muestra). Para NADH o NADPH a 340 nm, ε = 6,22 L·mmol⁻¹·cm⁻¹.

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Ingresa ΔA/min, los volúmenes y el coeficiente de extinción.

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Cómo se calcula

  • Actividad (U/L) = (ΔA/min muestra − ΔA/min blanco) × V total × 1.000 × dilución / (ε × paso óptico × V muestra).
  • Con ε en L·mmol⁻¹·cm⁻¹ y los volúmenes en la misma unidad. 1 U = 1 µmol de sustrato por minuto = 16,67 nkat; 1 U/L = 0,01667 µkat/L.
  • Para NADH/NADPH a 340 nm, ε = 6,22 L·mmol⁻¹·cm⁻¹ (6.220 L·mol⁻¹·cm⁻¹). Con paso óptico 1 cm, V total 1 mL y V muestra 0,02 mL, la fórmula se reduce a ΔA/min × 8.039.

Cómo usarlo

  • Mide la velocidad en la parte lineal de la curva, sin consumo apreciable del sustrato: si la reacción se agota, diluye la muestra y vuelve a medir.
  • La temperatura de la reacción cambia la actividad: el resultado vale a la temperatura en que se midió. Compáralo con los valores de referencia de esa misma temperatura.
  • Si tu sistema es automatizado, el analizador ya aplica un factor: esta calculadora sirve para métodos manuales, para verificar el factor o para enseñar.

Para el control de calidad del examen, mira Estadística del control.

Preguntas frecuentes

¿Cómo se calcula la actividad enzimática a partir de ΔA/min?

Actividad (U/L) = (ΔA/min muestra − ΔA/min blanco) × V total × 1.000 × dilución / (ε × paso óptico × V muestra), con ε en L·mmol⁻¹·cm⁻¹ y los volúmenes en la misma unidad.

¿Cuánto vale el coeficiente de extinción del NADH a 340 nm?

6,22 L·mmol⁻¹·cm⁻¹ (6.220 L·mol⁻¹·cm⁻¹). Con paso óptico 1 cm, V total 1 mL y V muestra 0,02 mL, la fórmula se reduce a ΔA/min × 8.039.

¿Cómo se pasa de U/L a µkat/L?

1 U = 1 µmol de sustrato por minuto = 16,67 nkat, así que 1 U/L = 0,01667 µkat/L.

¿En qué parte de la curva debo medir la velocidad?

En la zona lineal, sin consumo apreciable del sustrato. Si la reacción se agota, diluye la muestra y vuelve a medir.

¿Influye la temperatura en el resultado?

Sí. La actividad vale a la temperatura en que se midió, y hay que compararla con valores de referencia de esa misma temperatura.

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